Dies ist eine HTML Version eines Anhanges der Informationsfreiheitsanfrage 'Discussion on E171'.



Phenotyping  of  leukocytes  from  whole  blood,  Peyer’s  patches  and  spleen  was  performed  by  flow 
cytometry  using  antibodies  directed  against  rat  CD45  to  identify  rat  leukocytes,  CD103,  MHCII,  and 
CD11b/c to quantify dendritic cells, CD4 to quantify Thelper  cells, CD25 to quantify activated Thelper cells, 
and FoxP3 to identify Tregulatory (Treg) cells. In the 100-day study, tissue segments of small intestine, liver, 
spleen, lungs, and large intestine were fixed in formalin, and  testes were fixed in modified  Davidson’s 
solution. Tissues from the 100-day study were fixed and processed for histopathology. Hematoxylin and 
Eosin-stained sections of distal colon were evaluated for goblet cells, including the number per colonic 
gland, length of colonic gland, and number per unit length of glands. In addition, segments of proximal, 
mid, and distal colon were evaluated for aberrant crypt foci (ACF). 
 
Total body weight did not change with E171 administration in either the 7- or 100-day study. Food and 
water  consumption  were  similar  between  groups.  An  increase  in  spleen  cellularity  at  5,000  ppm  was 
observed  in  the  7-day  but  not  in  the  100-day  study.  No  significant  differences  were  observed  in  any 
E171  treatment  groups  in  the  7-day  or  100-day  studies  in  the  percentage  of  dendritic  cells,  CD4+, 
activated CD4+ or Treg cells in Peyer’s patches, spleen, or peripheral blood, compared to control diet-fed 
animals. This was also true in the rats pretreated with DMH in the 100-day study. The profile of cytokine 
production was determined in plasma, sections of jejunum, and colon with no significant changes in the 
cytokine  profile  observed  in  plasma  or  in  tissues  analyzed,  except  for  IL-17A  in  colon (DMH+400  ppm 
E171)  and  IL-12p70  in  plasma  (DMH+40  ppm  E171).    In  addition,  two  rats  exhibited  exceptionally 
elevated plasma IL-6 levels in the DMH+40 ppm E171 treatment group. In the 7-day study, T cells from 
Peyer’s  patches,  peripheral  blood,  and  spleen  were  activated  using  anti-CD3/anti-CD28  and  cytokine 
secretion was also evaluated. No significant changes in cytokine secretion were observed in any of the 
E171 treatment groups compared to control. 
 
In  the  100-day  study,  no  treatment  related  changes  were  visualized  by  histopathology  in  the  small 
intestine, liver, spleen, testis, or lungs. In the large intestine, one rat in the DMH+control diet group had 
2  separate  invasive  adenocarcinomas.  Further,  a  single  rat  in  each  of  the  DMH+40  ppm  E171  and 
DMH+400  ppm  E171  dose  groups  had  adenomas  of  the  large  intestine;  however,  no  other  animals 
exhibited  histologic  changes  in  the  large  intestine,  whether  pretreated  with  DMH  or  vehicle.  E171 
treatment produced no significant changes in ACF or in numbers of crypts per ACF.  As expected, there 

were significant differences in the number of ACF in the DMH pretreated rats compared to vehicle only, 
but the number of ACF were not significantly influenced by E171 treatment.  Furthermore, there were 
no differences between groups (even DMH vs. vehicle) in the number of goblet cells per colonic gland, 
the length of the glands or in the number of goblet cells per unit length of gland. 
 
In summary, with the exception of an increase in spleen cellularity at the 5,000 ppm E171 dose in the 7-
day  study  and  an  increase  in  IL-17A  in  colon  (DMH+400  ppm  E171)  and  IL-12p70  in  plasma  (DMH+40 
ppm E171) in the 100-day study, we did not observe any statistically significant changes associated with 
E171 administration in any other immune parameters in the small intestine, spleen, or blood, whether 
administered  by  itself  or  after  pretreatment  with  DMH.  Furthermore,  we  did  not  observe 
histopathologic changes related to E171 treatment in the tissues examined, including tumor formation, 
ACF, goblet cells, or histologic abnormalities. Our findings support the original observations of the 2-year 
bioassay (National Toxicology Program) in rats showing no evidence of a carcinogenic effect of TiO2 in 
the intestine or other tissues when administered in the diet at levels of 2.5 or 5% (25,000 and 50,000 
ppm). Thus, we conclude that there is minimal to no effect of E171 when administered in the diet on the 
immune system and no effect on the intestinal epithelium with respect to proliferation and cancer.