This is an HTML version of an attachment to the Freedom of Information request 'Request to EFSA for scientific opinion on "new GMOs"'.


Document 15
Kontaktai: +37069400210, xxxx@xxxxxxx.xxx 
Vilnius, 2019 

Turinys: 
 
1. 
 ............................................................................................................................. 3 
2. 
 
 ............................................................................... 5 
3. 
 .............................................. 8 
 ......................................................................... 8 
3.2 Genomo DNR sekos modifikavimas ..................................................................................... 9 
3.3 Epigenetiniai metodai .......................................................................................................... 14 
3.4 Kiti metodai ......................................................................................................................... 15 
4. 
 ............................................. 17 
.................................................................................................... 18 
 ......................................................................................... 19 
5. 
 ............................................................................. 21 
5.1 Derlingumo padidinimas ..................................................................................................... 22 
5.2 Atsparumas ligoms .............................................................................................................. 22 
5.3 Prisitaikymas prie aplinkos ................................................................................................. 23 
5.4 Atsparumas herbicidams ..................................................................................................... 23 
 .............................................................................................. 24 
5.6 Galimas NGMM pritaikymas Lietuvoje ............................................................................. 25 
6.  NGMM Lietuvoje ir pasaulyje .............................................................................................. 26 
7. 
 ...................................................................... 27 
8. 
 ..................................................................................................... 28 
9. 
 ................................................................................................................. 30 
 
 
 
 
 

 

1. 
 
,  medicinoje  ir  kitose  srityse  yra 
dirbamos 
s
kad norit patenkinti 
 
us 
produkcijos apimtys tarp 

(1). 
 
praturtinto  naudingomis  mityb
Tam,  kad 
  problemos 

 
pvz., 


poreikius bei 
tam, kad 
me 

 gen
 modifikacijos metod
toliau - 
NGMM) suteikiamus privalumus, sukuriant 
 
tar
 
visame pasaulyje kyla 
papildom  
 reguliuoja
(2). 
Europos  S
  (toliau  ES)   
organizmus  (toliau  - 
  metais.  Nuo  tada  GMO 
reguliuojantys 
 buvo taisomi, 
nekito, nors 
buvo pademonstruota, kad mutacijos organizmo DNR atsiranda ir 
(3). 
GMO  re
remiasi  Europos  Parlamento  ir  Tarybos  direktyva 
2001/18/EB 
-  2001/18/EB  direktyva).  Per  pastaruosius  metus  buvo 
/18/EB direktyv kyla daug 
,  NGMM 
 
yra 
tradiciniais 
metodais. ES 
 ir 
supaprastinta tvarka (4). Kinija ir Rusija investuoja 
did
 (5, 6). Tuo tarpu ES atveju, po 2018 m
 liepos 25 d. ES 
teisingumo  teismo  sprendimo,  visi  modifikuoti  organizmai, 
gautus 
 
mutagenez
  bus  laikomi  GMO  (7). 
 
  ioje 
  aptariami  biotechnologiniai  metodai,  priskirtini  prie  NGMM,  tokie  kaip  genomo 

 

as 

suteiktos  augalams  panaudojant  NGMM. 
 NGMM panaudojimo atvejai Lietuvoje ir Europoje bei reglamentavimo ypatumai 
kitose pasaulio 
ikiamos rekomendacijos NGMM reguliacijai Lietuvoje. 
 
 

 

2. 
 
 
 
Agroinfiltracija  (angl.  agroinfiltration)    metodas, 
 
), pristatyti transgenus siekiant pagaminti 
 
 (8). 
 
 
) (angl. random mutagenesis, traditional 
mutagenesis)  - 
,  kai  mutacijos 
 
org
mutagenais,  o  po  to  atrenkami  individai  su 
pageidaujamomis 
mis

arba cheminiai (pvz. alkilinimo agentai) (9). 
 (angl. base editing) - 

nti tikslingai 
 
 
(10).  
Cas9  (angl.  CRISPR  associated  protein  9)  -  d
  tikslinei  mutagenezei 
pa
, programuojama RNR pagalba (14, 15). 
  (angl.  zinc  finger  nucleases,  ZFN)   
 (8). 
 (angl.  cisgenesis) - 

organizme (3). 
CRISPR/Cas  (angl.  clustered  regularly  interspaced  palindromic  repeats/CRISPR 
associated)   
 
apsaugos  mechanizmas  lemian
 
CRISPR/Cas sistemas sudaro CRISPR regionas, 
-
i Cas genai (11). 
Egzogeninis genas (angl. exogenous)   genas 
 (9). 

 

(GMO)   
 

  (angl.  gene  editing)  - 
 
 
genomus (9).  
Insercija arba delecija (angl. insertion, deletion)   
 (9). 
 (angl. intragenesis)   tai 
DNR kombinacija (bet kuria orientacija), 
(3).  
 (angl. mutagenesis)   procesas, 
DNR seka
 
 (9). 
 (NGMM, angl. new plant breeding techniques, 
new  mutagenesis  techniques)  - 
metodai, sukurti po Europos Parlamento ir Tarybos 2001/18/EB direktyvos 
(1 3, 7, 9).  
Nuo  RNR  priklausomas  DNR  metilinimas  (angl.  RNA-directed  DNA  methylation, 
RdDM) - indukuojamas DNR c
metilinimas, 
veikti 
nt dirbtinius 
us, 
 (27, 28).  
Tiks
 
 SDN-1 (angl. site directed nucleases   1) 
specifi
parinktoje genomo vietoje (2). 
 
 SDN-2 (angl. site directed nucleases   2) - 
specifi
 
(2).  

 

 
-3 (angl. site directed nucleases   3)  
specifi
 
 (2).  
Oligonukleotidai (angl. oligonucleotides)   
 
(8). 
Oligonukleotidais indukuota 
 (angl. oligonucleotide-directed mutagenesis, 
ODM)  - 
 


 (8). 
  (angl.  off-target  mutations)   neplanuotos  mutacijos  tikslios 
stos kitoje vietoje nei numatytas taikinys. Jos 
 (9). 
TALE 
  (angl.  transcription  activator-like  effector  nucleases,  TALEN)   
 
(8). 
  (angl.  point  mutation)    mutacija  lemianti  tik  vienos 
 (9). 
 (angl. directed mutagenesis, site-
specific mutagenesis) - 
i fermentai - 
 (9). 
  (angl.  transgenesis)  
 (9). 
 
 

 

3. 
K
komi NGMM 
 
3.1 
 
NGMM  yra  laikomi  biotechnologijomis 
pvz., 
  metodai),  kurie  buvo  sukurti  po  Europos  Parlamento  ir  Tarybos  direktyvos 
  panaikinanti 
20/EEB 
 (1 3, 7, 9). NGMM 
modifikacij
pakeista.  Tai 
institucijoms.  
labai 
platus  ir 
Kai  kurie  metodai,  tokie 
,  yra 

bei 
kiti metodai yra seniai naudojami (pvz., skiepijimas), tiesiog jie pritaikyti panaudojant naujausias 

 
avimo 
transgenus, neperduodamus palikuoniams. 
 
a) 
:  
 -  Tiksli  
  taikiniui  specifines  nukleazes  (angl.  site  directed 
mutagenesis, SDM); 
 - 

 - Tiksli  
t trumpus viengrand
 oligonukleotidus (angl. oligo 
directed mutagenesis, ODM); 

 


intra

b) Epigenetiniai metodai: 
 - 
(RdDM) 
 
c) Kiti metodai: 
- Agroinfiltracija;  
- Skiepijimas (nemodifikuoto daigo 
); 
-  Negatyvi  selekcija  (m
). 
3.2 Genomo DNR sekos modifikavimas 

 apima metodus, kurie 
 tikslioje vietoje modifikuoti 
genom
  DNR 

i  tikslingai  keisti  naudojamas  metodas  remiasi 
taikiniui  specifin
  nukleaz
  (angl.  site  directed  nucleases,  toliau  SDN)
 
 
 
 (ZFN)
-
. D
vadinama Cas9 yra programuojama RNR pagalba (14, 15). Cas9 
 
su ja 
 ir viena 
atitinkama seka, 
tuo  tarpu  kita 
-kilpa.  Cas9 
baltymas turi du atskirus aktyviuosius centrus, kurie perkerpa 
 su 
RNR  DNR  grandin   tikslioje  vietoje  (1A  paveikslas).  Tokiu  b
Cas9  galima  gan  greitai 
 
 tereikia pakeisti 
gRNR sek
 taikinio seka yra pakankamai ilga, kad visoje 
  genomin
  DNR 
gaunamas mutantinis fermentas (dCas9), 
DNR,  bet  jos  nekirpti  (1B  paveikslas

 






pvz.,  DNR  c
adenino 
prie 
 genom
DNR sekos (10, 16).  
1  paveikslas.  Cas9  baltymo  DNR  kirpimo  mechanizmas.  A.  Cas9  baltymas  -  RNR 
 B. 
gaunamas baltymas dCas9, 
 (adaptuota 
pagal (17) ). 
 
zinc finger nucleases, toliau ZFN) ir transkripcijos efektorius 
transcription  activator  like  effector  nucleases,  toliau  TALEN) 
rie kurio yra prilietas FokI restrikcijos 
 nukleazinis 
domenas (18)
1996 m. (19)
 
 


o
b
 
 (20)

beveik visas 
 (20)
tokio 
omeno dimerizacija. 
To
 
 ZFN, nukreipt   gretimus taiki
m, kad endonukl
 (20). 
Nepaisant  pasitvirtinusio  molekulinio  mechanizmo,  ZFN 

 
 
efektyv
 
kerpa 
es sekas ir tai sunku prognozuoti (17).  
10 
 

  Xanthomonas  bakterijose  buvo  rastas  dar  vienas 
modulinis  DNR  at
,  pavadintas  transkripcijos  aktyvatorius  primenan
efektoriumi  (angl.  transcription  activator  like  effector,  toliau  TALE)  (21, 22).  Infekcijos  metu 
faktorius jungiasi prie 

. Galima tik 12 ir 13 
am
ies variacija   jos 
u
. Kaip ir ZFN 
atveju, 
leaziniu  domenu  gautas  veiksmingas  fermentas 
    TALE 
(23,  24)  . 
Lyginant  su  ZF
 
os  savait s)  bei  lengviau 
prognozuojamas, t
ir prigimties   visi TALE motyv
 
ios tarpusavyje (17).  
Tiksli
 
pa
  DNR 
 genomo vietoje (2 paveikslas)
 
 - nehomologinio 
o  (toliau NHEJ) arba 
s  rekombinacijos  (toliau  HR)  pagalba.  NHEJ  mechanizm
,  kai 
hanizmo pagalba, kirpimo vietoje atsiranda 
 
delecij   ar  insercij .  Tokia  mutagenez
,  kuomet  kontroliuojama  mutacijos  vieta,  bet  ne 
tipas,  vadinama  SDN-1  technologija. 
  kelias 
  pasitelkiamas, 
 
 
Homolog

DNR 
 kuriam 
reikalinga matrica, atitinkanti 

 
 
su 
trumpa DNR matrica, 
pokyt
Modifikacija 
ma 
,  o  jos 
 
os  DNR 
matricos seka. 
  yra lengva prognozuoti modifikacijos rezultatus  ir  tokia technologija 
vadinama SDN-2 (2 paveikslas). 

masto 

 
  tai  vadinama  SDN-3 technologija.  Tuomet 

 
 
11 
 










modifikuojamo genomo sekoms
technologija, kitaip nei tradiciniai 
gavimo 
nauj   sek  
yti 
2  paveikslas). 
 
bei 
 
 
 (8).  
 
2  paveikslas.  Tiksli  
kleazes  (pvz.,  Cas9). 
Taikiniui 
 
am 
pasirinktoje genomo 
DNR vietoje. Priklausomai nuo to, kokiu keliu vyksta 
-1 
-
(SDN-3 technologija).  
 
Naujausia taikiniui 
 
angl. base editing), 
ntis 
 (16, 25). 
s laikomas saugesne alternatyva, nes 
 
e toksinio poveikio 
e. 
e
paremta 
, kurios modifikuoja 
citozino arba adenino bazes 
 - 
amino funkcines grupes. Taip citozinas 
uracilu,  kuris  DNR  replikacijos  metu 
  skaitomas  kaip  timinas. 
adenino  gaunamas  inozinas  kuris  vykstant  replikacijai  yra 
skaitomas kaip g
 citozino-guanino poros pakeitimas 
timino-a
adenino-timino poros  guanino-citozino. 
 suliejus su 
12 
 

 (dCas9) (1B paveikslas) 
 tiksliai nukreip
 DNR 
 modifikuoti. dCas9 jungiasi prie DNR sudarydamas R-
 gidu
n
lieka  neapsaugota  d

sulietos su dCas9 (16, 25). 
i pritaikytas 
daug 
 
 
vienu metu (26). 
. oligo directed mutagenesis
 
 
arba chimeriniai fragmentai 
augalo  genome.  Tik  vienas  ar  keli  nukleotidai,  esantys  oligonukleotido  centre,  nesutampa  su 
pirmine DNR seka   

 

s
(8). 
os  atskirai, 
organizmo  DNR,  su  kuriuo 
  perdavimas 

 
  kokiu  metodu 
DNR. 
  -  tai  organizmo 
, kuriai panaudotas genas 
, su 


(promotoriai, terminatori
(3).  Tuo  tarpu 
 skiriasi tuo, kad yra 
kokia orientacija, kurios 
taip  pat 
(3). 
Visi metodai, skirti genomo sekai modifikuoti, 
tradicinei transgenezei, p
 taikiniui specifines 
nukleazes galima 
3 paveikslas).  
13 
 










skirtumai.  
SDN-
a yra 

N-2, 
-
pagal (2)).  
 
3.3 Epigenetiniai metodai 
Epigenetiniai metodai, tokie kaip nuo RNR priklausomas DNR metilinimas arba nuo RNR 

dinti  ar 
reguliacijai ir yra paveldimas bent keliose kartose. DNR metilinimas taip pat 
 
chrom
   
  -  modifikacijomis.  Yra  pademonstruota,  kad  DNR 
metilinimas  lemia  ir  lokalias 

paveikti 
nt keliose 
kartose, net kai 
 
 veiksnio , 

norimoje  vietoje  galima  sukelti  panaudojant  neseniai  (1B  paveikslas)  sukurtus  molekulinius 
iuose  prie  dCas9  baltymo  yra  prijungtas  DNR  metilinimo  arba  histonus 
14 
 

modifikuojantis domenas (27, 28)
 
 kaip baltymo-RNR kompleksas. 
augalo dalis 
taip pat 
(2). 
pats seniausias metodas 
 

u  (angl.  virus-induced  gene  silencing,  VIGS)
is  metodas  veikia  per  augaluose 
RNR interferencijos 
 Jis remiasi tuo, jog 
seka, 
prasminis  nepageidaujamo  geno  informacinei 
 
rios 

 (12, 13) 
3.4 Kiti metodai 
su biotechnologijomis. Agro-infiltracija 
 
, lapus) pristatyti transgenus siekiant pa
tampa vienu 
 
 indukuoti, gaminant biologines 
 (29). Agro-infiltracijai naudojamos Agrobacterium sp. bakterijos, DNR plazmidiniame 
vektoriuje ko
Agrobacterium sp. bakterijomis 
suleista  atskiras augalo dalis, arba pristatyta panaudojant 

anaudojami 
,  nuskinti  lapai)  arba 
Jei 
agrobakterij
 
lokalizuotoje augalo dalyje. 
ansgenas 
o DNR 
 
bei 
. Tokiu atveju, 
s ir palikuoniams 
(8).  
Skiepijimas 
augalo 
(poskiepio).  Jei 
 
 
e
15 
 

pav
(8).  
reikalingas  transgeno 
s
selekcijos pagalba. 
, galima 

  nuo  RNR  priklausomo  DNR  metilinimo  pagalba. 
  naudojant 
 (8). 
 
 
 
16 
 

4. 
G
naudojant NGMM 
tos 
kelios NGMM mokslin  
, kurie vertino ir galimas rizikas (1 3, 9, 30). Vertinant rizik  
modifikacijos  keliamus 
atsitikimo 
Pagal 2001/18/EB 
(priedas II) ir r
B) Nr. 1829/2003, bet kurios potencialiai 
 

  yra  panaudojama  sudaryti  rizikos  hipotezes, 
tolimesniuose etapuose. 
 

, rizika vertinama lyginant 
saugus vartojimas patvirtintas ilgalaikiai 
 Poveikio 
aplinkai  rizikos  vertinimas  yra  rekomenduojamas,  bet  kadangi  negalima 
  saugaus 
naudojimo  istorij , 
vertinamas  rizikos  dydis 
.  Kitaip  tariant, 
mod
 
, o vertinama 
labiau 
 
u
iuos kriterijus labai sunku vertinti 
 (2). 
aus sveikatai 
kurias 
sveikatai  lemia  GMO  auginimas,  bet  ne  kiti 
  to  kylantys  padariniai. 
alergines
 (30). Tuo 
 
 
valdymas. G
naujos savyb s gali atsiras
 


 
Vertinant  NGMM 
savybes, 
: i) m
 
(kai  naudojamas);  ii)  faktas,  kad  modifikacija  yra  pasirenkama  tikslingai;  iii)  keletas 
ama vienu metu. 
17 
 

Bendrai NGMM rizik
grupes 
1): 
1.
n
 geno likimas 
;  
2.
rizikos  susijusios  su  tuo,  kad  NGMM  lems 

3.
r
 
 
1 l
 
 
Rizikos veiksnys 
 
 
 
Socioekonominiai veiksniai 
Monopolizacija 
 
 
Poveikis aplinkinei biologinei 
 
 
individualiai 
 
4.1 
NGMM efektai 
M gali 
. Pirmiausia, 
naudojami genomui 
Metodai, 
kurie naudoja baltymus kaip - 
iki 5 n
 (15, 
31, 32)
genomas perkerpama
o su dvejomis 
, tai gali 
 (33, 34). 
iai 
ir  kitoms  tikslioms  nukle
N)  (35,  36), 
,  kurie  remiasi  Cas9 
18 
 

baltymu su 
 (pvz. 
o technologija) (37, 38). Reikia 

 (2). M
, tokie kaip Cas9, 
yra  intensyviai  tobulinami  ir  tampa  vis  saugesni  (39 41).  Be  to,  yra 


ntys kontroliuoti 
, tokie kaip tiesioginis baltymo-
RNR komplekso pristatymas 
tiksl
 (42).  
Dauguma NGMM 
 
baltymo-
RNR 
koduojanti DNR ar RNR 
 
.  Norint  i
rekomenduojama patikrinti, 
, tai yra ar organizmas netapo transgeniniu (2).  
agroinfiltracija ar skiepijimas ant GMO 
.  Agroinfiltracijos  atveju 
augalo 

  -  kad  transgenas  bus  perduotas 
nemodifikuotai augalo daliai bei palikuoniams (8). 
4.2 
 
Nors greitesnis 
 
 
 procesas yra svarbus 
 
savybes 
odai
 skirtingus genus vienu metu (angl. multiplexing) (43). 

.  
19 
 

vedimo greitis 
 
ir maisto apdorojimo 
int 
Daug didesnis NGMM efektyvumas gali lemti 
 
 potencialiai 
omis  savyb
,  o  taip  pat  ir 
 
,  kad  tai 

prireiks  laiko  prisitaikyti. 
 
srities 
 ir konkuruoti. 
aplinkinei biologinei 
 (2). 
monopolizuota (
 
as ir did  
), kaip ai 
(44). 
 ir tai gali padaryti tik 
 
(30). 
4.3 
 
Gali  kilti  r
veislei, 
  Naujai 
suteiktos 
 
 
padaryti  augalus  atspariu
  (45,  46).  Reikia 
- tiek 
 



kaip atsparumas druskingumui, sausrai 
 plotus (2).  
 
 
20 
 
















5. 
K
 
Pagrindinis  NGMM  panaudojimo  tikslas  yra 
suteikti  naujas 
naudingas savybes, 
a gauti tradicin
 
 bent 
(4 paveikslas).  
 
 4 paveikslas. NGMM 
 (adaptuota pagal (46)) 
 
 (45 47) (4 paveikslas). Be 
  genus  bei  sekos 
variantus bei modifikaci
 (46).  
 
   
21 
 

5.1 Derlingumo padidinimas 
derlingumas. Derlingumas 
quantitative  trait  loci
(48, 49)
tarpu N
derlingumo padidinimo 
kelias pasitelkiant tiksli
-
2 paveikslas) 
(46, 50, 51). Taip 
Oriza  sativa)  buvo  gautas 
(52).  
5.2 Atsparumas ligoms 
ogenais:  virusais, 
(46, 53)
 atsparius augalus. Tam buvo pritaikytos bent 2 
strategijos.  
Pirmuoju keliu 
(46)
Xanthomonas  citri  bakterijoms  augalams  buvo  suteiktas  Cas9 
pagalba modifikavus CsLOB1 geno promotoriaus sek
jo 
 patenka 
b
, kuris jungiasi prie CsLOB1 geno promotoriaus, 
augalo promotoriaus 
(54)
Xanthomonas 
rice blight). Bakterija 
 
22 
 

patogeno poreikius. Jau 2012 m. mokslininkai modifikavo 
 

(55), o 2019 m. 
buvo  sukurti 
Xanthomonas  oryzae 
kamienams 
 (56). 

dauginimuisi.  Atsparumas  gryb
 
angl.  powdery  mildew)  buvo 
3 augalo genus: TAMLO-A, TAMLO-B ir TAMLO-D (56)
omidorai - 
(57). 
5.3 Prisitaikymas prie aplinkos 
, tokie 

(47). Kintantis 
 
 
Augalai,  kurie 
prisitaikymo  mechanizmus,  gali  geriau  pakelti  nepalankias 
 
a,  t
as  vaidmuo  tenka 
transkripcijos reguliacijos veiksniams (58)
, kurie genai 
svarba 
panaudojant  tradicinius 
(59).  Arabidobsis  augalo  atsparumas 
sausrai buvo padidintas 
kuri 
 
(60)
 
 

bet 
(61).  
5.4 Atsparumas herbicidams 
ku
vietos bei 
    herbicidai   
 
arbius 
 
, bet gali 
iniams augalams
, nes pakelia 
gaus  sveikatai,  neigiamai  veikti 
23 
 

bio
(46). 
 
  herbicidams  atsparius  augalus  buvo 
panaudojama 

, kurie skaido herbicidus. Ten, 

ir  neigiami 
naudojimo padariniai (62).  
 
,  kuris  dalyvauja  svarbiame  metaboliniame 
, chemikalai (imidazolinonai, sulfonilkarbamidai
ktato 

edagavimo  metodus  (ODM,  TALEN  ar  Cas9) 
buvo 
 (bulv
, sojos, 
 ALS aktyvusis centras ir gautos 

 (62)
a leido gauti ir glikofosfatui atsparius 
linus 
us (63, 64)

    5-
-3-fosfato 
kuri  dalyvauja 
pirmtako 
 
 
 
-  potencialus  kancerogenas,  kuris 
i
kurias  kepant  nesusidaro  akrilamidas  (65)
itim ,  taip  pat 
likopeno kiekius (46). 
Au

vienos 

s  (
)  arba 
os  (amilopektinas).  Augalai,  kurie  sintetina 

24 
 

a


 yra sunku pa
 
oms 
sukurti 
-1 technologijos 

dalyvaujantis krakmolo 
(66, 67). 
Cas9 technologija buvo panaudota ir siekiant 
norint 
pagerinti tiek maistines savybes, tiek biokuro 
ose 
 

oksidacinio stabilumo. Pa
angl.  fatty  acid  desaturases,  FAD). 
i
-A1 ir FAD2-
go 
net 4 kartus (46, 59). 
5.6 Galimas NGMM pritaikymas Lietuvoje 
, esant tokiai galimybei, jos 
 
potencialo  didinti 
derlingum   ir 
atsparum  
 taip pat 
bei 
 
as remiasi atsparumo ligoms didinimu
usios 
 Italijoje pavyzdys (68) 
buvo sunaikinta apie ketvirtadalis 
(69)

atsparumu ligoms, 
 
 nuostolius.  
Ir  galiausiai, 
 

vartoti maistingesnius ir naudingesnius maisto produktus.  
 
 
25 
 

6. 
NGMM Lietuvoje ir pasaulyje 
www.gmo.am.lt). Tai patvirtina 
Ta
S
us. 
(70). 
panaudojimu  bei  poveikio  aplinkai  vertinimu  vykdomi  Vokietijoje  (4). 

taip pat 
2017-2019 
analizes apie 
 aplinkai 


 
nekelia 
papildom
Ta
panaudojant 
 sukurtus organizmus 
pagal naujas 
 jiems gauti (2, 30).   
ES 
(5, 6, 71). 

JAV 
tarnyba (angl. Food and Drug Administration, FDA) 
, kad panaudojant NGMM 
, kol mutacijos yra tokios pat, 
(71,  72)
  reguliacijos,  tai  yra,  bus 

,  kokias  naujas  savybes  ji  turi.  Poveikis 
sveikatai ir aplinkai bus vertinamas tik tada, jei atsiranda naujos 
, nepriklausomai ar augalo 

  (73).  Australija  pasirinko  kiek 
g
 nei JAV
 tik tokiu atveju, jei NGMM 
seka (74). 
 
manoma, 
 investuoja labai dideles 
 
mui 
(5). 
Rusijoje  pradedama  1.7 
 
30 
panaudojant gen  redagavim  (6). 
 
, ES ateityje gali tapti 
jos  gyventojai  praras  galimyb
aplinkoje ir 
 
 
26 
 

7. 
reglamentavimas Lietuvoje 
Parlamento  ir  Tarybos  direktyva  2001/18/EB 
tradiciniams 
kurie  yra  paremti  naujausiais  b
  nebuvo  sutarta  kaip  reguliuoti  NGM 
liepos  25  d.  Europos  teisingumo  teismas 
visi  organizmai,  sukurti  panaudojant 
ojami  kaip  GMO  ir reguliuojami  2001/18/BE  direktyvos. 
taikoma tik tradiciniams 
 
 
tik 
Tuo tarpu 
ar  metodai,  kuriose  naudojamas  transgenas  neperduodamas  palikuoniams,  reguliavimo 
  
 
 
27 
 

8. 
 
Nors  2018  m.  Liepos  25  d.  Europos  teisingumo  teismo  priimtas  sprendimas  GMO 
, jis ne sprend  
, su kuriais susiduria 
ES  ir  visa 
 
 
populiacija 
 
 

NGMM 
tai 
reikalingomis 
  DNR  modifikacijas,  kurios  yra 
  gaunamoms 
ais.  Be  to, 
moksliniai tyrimai rodo, 
tikslesni 
transgenez , o daugeliu atveju net 
 
 mutagenez  
, jei 
 
K
tiek 

  

NGMM metodu gaut  
 

 

yra Kanados sprendimas organizmus reguliuoti ir kontroliuoti ne pagal tai kokiu 
jie 
.  Juk  n
sveikatai  ir 
aplinkai sukelti gali ne pati DNR modifikacija, bet nauj
 organizmo 
Be to t
nereguliavimas 

 
 
, kad buvo panaudotos 
redagavimo  technologijos. 
reguliavimas.  
GMO 
,  naudojamas  2001/18/EB  direktyvoje,  buvo  priimtas  1990  m.  ir  yra 
iuo metu jau yra 

 ir 
  2001/18/EB  direktyvoje 
 
priskiriamos. Be to, 
iai 
  proceso    DNR  reparacijos   
28 
 

S
 tam, 
naujausiais moksliniais 

optimalus sprendimas b
s,  moksl
,  verslo,  politik )  diskusija  sprendimui  priimti. 
  atsakingoms 

kad tokios di

 
 
29 
 

9. 
 
 
1. Joint Research Renter (2011) New plant breeding techniques. State-of-the-art and prospects 
for commercial development. 
http://publications.jrc.ec.europa.eu/repository/handle/JRC63971 
2. High Council for Biotechnology (HCB) (2017) An opinion on NPBTs. 
http://www.hautconseildesbiotechnologies.fr/fr/avis/avis-sur-nouvelles-techniques-
dobtention-plantes-new-plant-breeding-techniques-npbt 
3. EFSA Panel,G.M.E.P. (2012) Scientific opinion addressing the safety assessment of plants 
developed through cisgenesis and intragenesis. EFSA J., 10, 2561. 
4. Eckerstorfer,M.F., Engelhard,M., Heissenberger,A., Simon,S. and Teichmann,H. (2019) 
Plants Developed by New Genetic Modification Techniques Comparison of Existing 
Regulatory Frameworks in the EU and Non-EU Countries. Front. Bioeng. Biotechnol., 7. 
5. Cohen,J. (2019) To feed its 1.4 billion, China bets big on genome editing of crops. Science, 
10.1126/science.aay8951. 
6. Dobrovidova,O. (2019) Russia joins in global gene-editing bonanza. Nature, 569, 319 320. 
7. Laaninen,T. (2019) New plant-breeding techniques: Applicability of EU GMO rules. 
https://www.europarl.europa.eu/thinktank/en/document.html?reference=EPRS_BRI(2019)6
42235 
8. Lusser,M. and Davies,H. V. (2013) Comparative regulatory approaches for groups of new 
plant breeding techniques. N. Biotechnol., 30, 437 446. 
9. SAM (2018) Scientific Perspective on the Regulatory Status of Products Derived from Gene 
Editing and the Implications for the GMO Directive. 10.2777/407732. 
10. Komor,A.C., Kim,Y.B., Packer,M.S., Zuris,J.A. and Liu,D.R. (2016) Programmable editing 
of a target base in genomic DNA without double-stranded DNA cleavage. Nature, 533, 
420 424. 
11. Barrangou,R., Fremaux,C., Deveau,H., Richards,M., Boyaval,P., Moineau,S., Romero,D.A. 
and Horvath,P. (2007) CRISPR Provides Acquired Resistance Against Viruses in 
Prokaryotes. Science, 315, 1709 1712. 
12. Lu,R., Martin-Hernandez,A.M., Peart,J.R., Malcuit,I. and Baulcombe,D.C. (2003) Virus-
induced gene silencing in plants. Methods, 30, 296 303. 
13. Unver,T. and Budak,H. (2009) Virus-Induced Gene Silencing, a Post Transcriptional Gene 
Silencing Method. Int. J. Plant Genomics, 2009, 1 8. 
14. Gasiunas,G., Barrangou,R., Horvath,P. and Siksnys,V. (2012) Cas9-crRNA 
ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in 
bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 109, E2579-2586. 
15. Jinek,M., Chylinski,K., Fonfara,I., Hauer,M., Doudna,J.A. and Charpentier,E. (2012) A 
programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. 
Science, 337, 816 21. 
16. Gaudelli,N.M., Komor,A.C., Rees,H.A., Packer,M.S., Badran,A.H., Bryson,D.I. and 
30 
 

cleavage. Nature, 10.1038/nature24644. 
17. Gasiunas,G. and Siksnys,V. (2013) RNA-dependent DNA endonuclease Cas9 of the CRISPR 
system: Holy Grail of genome editing? Trends Microbiol., 21, 562 7. 
18. Bitinaite,J., Wah,D.A., Aggarwal,A.K. and Schildkraut,I. (1998) FokI dimerization is 
required for DNA cleavage. Proc. Natl. Acad. Sci., 95, 10570 10575. 
19. Kim,Y.G., Cha,J. and Chandrasegaran,S. (1996) Hybrid restriction enzymes: zinc finger 
fusions to Fok I cleavage domain. Proc. Natl. Acad. Sci., 93, 1156 1160. 
20. Klug,A. and Rhodes,D. (1987) Zinc Fingers: A Novel Protein Fold for Nucleic Acid 
Recognition. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 52, 473 482. 
21. Moscou,M.J. and Bogdanove,A.J. (2009) A Simple Cipher Governs DNA Recognition by 
TAL Effectors. Science, 326, 1501 1501. 
22. Boch,J., Scholze,H., Schornack,S., Landgraf,A., Hahn,S., Kay,S., Lahaye,T., Nickstadt,A. 
and Bonas,U. (2009) Breaking the Code of DNA Binding Specificity of TAL-Type III 
Effectors. Science, 326, 1509 1512. 
23. Li,T., Huang,S., Jiang,W.Z., Wright,D., Spalding,M.H., Weeks,D.P. and Yang,B. (2011) 
TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and FokI DNA-
cleavage domain. Nucleic Acids Res., 39, 359 372. 
24. Christian,M., Cermak,T., Doyle,E.L., Schmidt,C., Zhang,F., Hummel,A., Bogdanove,A.J. 
and Voytas,D.F. (2010) Targeting DNA Double-Strand Breaks with TAL Effector 
Nucleases. Genetics, 186, 757 761. 
25. Kim,Y.B., Komor,A.C., Levy,J.M., Packer,M.S., Zhao,K.T. and Liu,D.R. (2017) Increasing 
the genome-targeting scope and precision of base editing with engineered Cas9-cytidine 
deaminase fusions. Nat. Biotechnol., 10.1038/nbt.3803. 
26. Mishra,R., Joshi,R.K. and Zhao,K. (2019) Base editing in crops: current advances, 
limitations and future implications. Plant Biotechnol. J., 10.1111/pbi.13225. 
27. Thakore,P.I., Black,J.B., Hilton,I.B. and Gersbach,C.A. (2016) Editing the epigenome: 
technologies for programmable transcription and epigenetic modulation. Nat. Methods, 13, 
127 137. 
28. Xie,N., Zhou,Y., Sun,Q. and Tang,B. (2018) Novel Epigenetic Techniques Provided by the 
CRISPR/Cas9 System. Stem Cells Int., 2018, 1 12. 
29. Norkunas,K., Harding,R., Dale,J. and Dugdale,B. (2018) Improving agroinfiltration-based 
transient gene expression in Nicotiana benthamiana. Plant Methods, 14, 71. 
30. The Danish Agricultural Agency (2018) New plant breeding techniques   is there a risk? 
lbst.dk/fileadmin/user_upload/NaturErhverv/Filer/Styrelsen/Moed_os/Orientation_paper_Ri
sc_ENG.pdf 
31. Fu,Y., Sander,J.D., Reyon,D., Cascio,V.M. and Joung,J.K. (2014) Improving CRISPR-Cas 
nuclease specificity using truncated guide RNAs. Nat. Biotechnol., 10.1038/nbt.2808. 
32. Tsai,S.Q., Zheng,Z., Nguyen,N.T., Liebers,M., Topkar,V. V, Thapar,V., Wyvekens,N., 
Khayter,C., Iafrate,A.J., Le,L.P., et al. (2015) GUIDE-seq enables genome-wide profiling 
31 
 

of off-target cleavage by CRISPR-Cas nucleases. Nat. Biotechnol., 33, 187 197. 
33. Kosicki,M., Tomberg,K. and Bradley,A. (2018) Repair of double-strand breaks induced by 
CRISPR Cas9 leads to large deletions and complex rearrangements. Nat. Biotechnol., 36, 
765 771. 
34. Pacher,M., Schmidt-Puchta,W. and Puchta,H. (2007) Two Unlinked Double-Strand Breaks 
Can Induce Reciprocal Exchanges in Plant Genomes via Homologous Recombination and 
Nonhomologous End Joining. Genetics, 175, 21 29. 
35. Lin,Y., Fine,E.J., Zheng,Z., Antico,C.J., Voit,R.A., Porteus,M.H., Cradick,T.J. and Bao,G. 
(2014) SAPTA: a new design tool for improving TALE nuclease activity. Nucleic Acids 
Res., 42, e47 e47. 
36. Hendel,A., Fine,E.J., Bao,G. and Porteus,M.H. (2015) Quantifying on- and off-target genome 
editing. Trends Biotechnol., 33, 132 140. 
37. Zhou,C., Sun,Y., Yan,R., Liu,Y., Zuo,E., Gu,C., Han,L., Wei,Y., Hu,X., Zeng,R., et al. 
(2019) Off-target RNA mutation induced by DNA base editing and its elimination by 
mutagenesis. Nature, 571, 275 278. 
38. Xin,H., Wan,T. and Ping,Y. (2019) Off-Targeting of Base Editors: BE3 but not ABE induces 
substantial off-target single nucleotide variants. Signal Transduct. Target. Ther., 4, 9. 
39. Slaymaker,I.M., Gao,L., Zetsche,B., Scott,D.A., Yan,W.X. and Zhang,F. (2016) Rationally 
engineered Cas9 nucleases with improved specificity. Science, 351, 84 88. 
40. Kleinstiver,B.P., Pattanayak,V., Prew,M.S., Tsai,S.Q., Nguyen,N.T., Zheng,Z. and 
Joung,J.K. (2016) High-fidelity CRISPR Cas9 nucleases with no detectable genome-wide 
off-target effects. Nature, 529, 490 495. 
41. Hajiahmadi,Z., Movahedi,A., Wei,H., Li,D., Orooji,Y., Ruan,H. and Zhuge,Q. (2019) 
Strategies to Increase On-Target and Reduce Off-Target Effects of the CRISPR/Cas9 
System in Plants. Int. J. Mol. Sci., 20, 3719. 
42. Peterson,B.A., Haak,D.C., Nishimura,M.T., Teixeira,P.J.P.L., James,S.R., Dangl,J.L. and 
Nimchuk,Z.L. (2016) Genome-Wide Assessment of Efficiency and Specificity in 
CRISPR/Cas9 Mediated Multiple Site Targeting in Arabidopsis. PLoS One, 11, e0162169. 
43. Qi,W., Zhu,T., Tian,Z., Li,C., Zhang,W. and Song,R. (2016) High-efficiency CRISPR/Cas9 
multiplex gene editing using the glycine tRNA-processing system-based strategy in maize. 
BMC Biotechnol., 16, 58. 
44. Maghari,B.M. and Ardekani,A.M. (2011) Genetically modified foods and social concerns. 
Avicenna J. Med. Biotechnol., 3, 109 17. 
45. Ricroch,A.E. and Hénard-Damave,M.-C. (2015) Next biotech plants: new traits, crops, 
developers and technologies for addressing global challenges. Crit. Rev. Biotechnol., 
10.3109/07388551.2015.1004521. 
46. Sedeek,K.E.M., Mahas,A. and Mahfouz,M. (2019) Plant Genome Engineering for Targeted 
Improvement of Crop Traits. Front. Plant Sci., 10. 
47. Wang,F., Wang,C., Liu,P., Lei,C., Hao,W., Gao,Y., Liu,Y.-G. and Zhao,K. (2016) Enhanced 
Rice Blast Resistance by CRISPR/Cas9-Targeted Mutagenesis of the ERF Transcription 
32 
 

Factor Gene OsERF922. PLoS One, 11, e0154027. 
48. Bai,X., Wu,B. and Xing,Y. (2012) Yield-related QTLs and Their Applications in Rice 
Genetic ImprovementF. J. Integr. Plant Biol., 54, 300 311. 
49. Zuo,J. and Li,J. (2014) Molecular Genetic Dissection of Quantitative Trait Loci Regulating 
Rice Grain Size. Annu. Rev. Genet., 48, 99 118. 
50. Song,G., Jia,M., Chen,K., Kong,X., Khattak,B., Xie,C., Li,A. and Mao,L. (2016) 
CRISPR/Cas9: A powerful tool for crop genome editing. Crop J., 4, 75 82. 
51. Ma,X., Zhu,Q., Chen,Y. and Liu,Y.-G. (2016) CRISPR/Cas9 Platforms for Genome Editing 
in Plants: Developments and Applications. Mol. Plant, 9, 961 974. 
52. Li,M., Li,X., Zhou,Z., Wu,P., Fang,M., Pan,X., Lin,Q., Luo,W., Wu,G. and Li,H. (2016) 
Reassessment of the Four Yield-related Genes Gn1a, DEP1, GS3, and IPA1 in Rice Using a 
CRISPR/Cas9 System. Front. Plant Sci., 7. 
53. Savary,S., Ficke,A., Aubertot,J.-N. and Hollier,C. (2012) Crop losses due to diseases and 
their implications for global food production losses and food security. Food Secur., 4, 519
537. 
54. Peng,A., Chen,S., Lei,T., Xu,L., He,Y., Wu,L., Yao,L. and Zou,X. (2017) Engineering 
canker-resistant plants through CRISPR/Cas9-targeted editing of the susceptibility gene 
CsLOB1 promoter in citrus. Plant Biotechnol. J., 15, 1509 1519. 
55. Li,L., Piatek,M.J., Atef,A., Piatek,A., Wibowo,A., Fang,X., Sabir,J.S.M., Zhu,J.-K. and 
Mahfouz,M.M. (2012) Rapid and highly efficient construction of TALE-based 
transcriptional regulators and nucleases for genome modification. Plant Mol. Biol., 78, 407
16. 
56. Oliva,R., Ji,C., Atienza-Grande,G., Huguet-Tapia,J.C., Perez-Quintero,A., Li,T., Eom,J.-S., 
Li,C., Nguyen,H., Liu,B., et al. (2019) Broad-spectrum resistance to bacterial blight in rice 
using genome editing. Nat. Biotechnol., 37, 1344 1350. 
57. Nekrasov,V., Staskawicz,B., Weigel,D., Jones,J.D.G. and Kamoun,S. (2013) Targeted 
mutagenesis in the model plant Nicotiana benthamiana using Cas9 RNA-guided 
endonuclease. Nat. Biotechnol., 31, 691 693. 
58. Golldack,D., Li,C., Mohan,H. and Probst,N. (2014) Tolerance to drought and salt stress in 
plants: Unraveling the signaling networks. Front. Plant Sci., 5. 
59. Haun,W., Coffman,A., Clasen,B.M., Demorest,Z.L., Lowy,A., Ray,E., Retterath,A., 
Stoddard,T., Juillerat,A., Cedrone,F., et al. (2014) Improved soybean oil quality by targeted 
mutagenesis of the fatty acid desaturase 2 gene family. Plant Biotechnol. J., 12, 934 940. 
60. Osakabe,Y. and Osakabe,K. (2014) Genome editing with engineered nucleases in plants. 
Plant Cell Physiol., 10.1093/pcp/pcu170. 
61. Shi,J., Gao,H., Wang,H., Lafitte,H.R., Archibald,R.L., Yang,M., Hakimi,S.M., Mo,H. and 
Habben,J.E. (2017) ARGOS8 variants generated by CRISPR-Cas9 improve maize grain 
yield under field drought stress conditions. Plant Biotechnol. J., 15, 207 216. 
62. Lombardo,L., Coppola,G. and Zelasco,S. (2016) New Technologies for Insect-Resistant and 
Herbicide-Tolerant Plants. Trends Biotechnol., 34, 49 57. 
33 
 

63. Li,J., Meng,X., Zong,Y., Chen,K., Zhang,H., Liu,J., Li,J. and Gao,C. (2016) Gene 
replacements and insertions in rice by intron targeting using CRISPR Cas9. Nat. Plants, 2, 
16139. 
64. Sauer,N.J., Mozoruk,J., Miller,R.B., Warburg,Z.J., Walker,K.A., Beetham,P.R., 
Schöpke,C.R. and Gocal,G.F.W. (2016) Oligonucleotide-directed mutagenesis for precision 
gene editing. Plant Biotechnol. J., 14, 496 502. 
65. Clasen,B.M., Stoddard,T.J., Luo,S., Demorest,Z.L., Li,J., Cedrone,F., Tibebu,R., Davison,S., 
Ray,E.E., Daulhac,A., et al. (2016) Improving cold storage and processing traits in potato 
through targeted gene knockout. Plant Biotechnol. J., 14, 169 176. 
66. Waltz,E. (2016) CRISPR-edited crops free to enter market, skip regulation. Nat. Biotechnol., 
34, 582 582. 
67. Andersson,M., Turesson,H., Nicolia,A., Fält,A.-S., Samuelsson,M. and Hofvander,P. (2017) 
Efficient targeted multiallelic mutagenesis in tetraploid potato (Solanum tuberosum) by 
transient CRISPR-Cas9 expression in protoplasts. Plant Cell Rep., 36, 117 128. 
Nature, 563, 
306 307. 
69. MacKenzie,D. (2019) A quarter of all pigs have died this year due to African swine fever. 
New Sci. 
70. Genius project (2012) https://www.inra-transfert.fr/en/actualites/102-8-projets/303-genius 
71. Waltz,E. (2018) With a free pass, CRISPR-edited plants reach market in record time. Nat. 
Biotechnol., 36, 6 7. 
72. Editorial (2018) A CRISPR definition of genetic modification. Nat. Plants, 4, 233 233. 
73. Friedrichs,S., Takasu,Y., Kearns,P., Dagallier,B., Oshima,R., Schofield,J. and Moreddu,C. 
(2019) An overview of regulatory approaches to genome editing in agriculture. Biotechnol. 
Res. Innov., 3, 208 220. 
74. Mallapaty,S. (2019) Australian gene-
Nature, 
10.1038/d41586-019-01282-8. 
 
34