This is an HTML version of an attachment to the Freedom of Information request 'EMEA/V/A/059 - Opinion following an Article 34 referral for Doxycycline 50% WSP'.



 
13 April 2011 
EMA/CVMP/609955/2010 
Veterinary Medicines and Product Data Management 
 
(Co)Rapporteurs’ referral assessment report  
For Doxycycline 50% WSP and associated names 
Inn/active substance: Doxycycline hyclate 
Procedure no: EMEA/V/A/059 
April 2011 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Rapporteur
Ms Helen Jukes  
Co-rapporteur:  Dr Jiří Bureš
 
 
7 Westferry Circus  Canary Wharf  London E14 4HB  United Kingdom 
Telephone  +44 (0)20 7418 8400  Facsimile +44 (0)20 7418 8447 
E
 
-mail xxxx@xxx.xxxxxx.xx  Website www.ema.europa.eu 
An agency of the European Union   
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
This document is an unredacted copy of part of the CVMP rapporteur and 
co-rapporteur referral assessment report of 13 April 2011 for Doxycycline 
50% WSP and associated names (Procedure no: EMEA/V/A/059). 
 
Below is the section of the assessment report dealing with the residue 

depletion study supporting a meat withdrawal period of 5 days when 
chicken are administered at 25 mg doxycycline hyclate per kg body weight 
for 5 days. 
Page 2/7 
 

2.2.4  Withdrawal Periods 
The following MRLs have been established for doxycycline: 
  Pharmacologically active 
Marker 
Target 
Other 
substance(s) 
residue 
Species 
MRLs 
(µg/kg) 
tissue 
provisions 
Doxycycline 
Doxycycline 
Bovine,  
100  Muscle 
Table 1 of 
300  Liver 
Reg. 
600  Kidney 
37/2010.  
Porcine, 
100  Muscle 
 
poultry 
Not for use 
in animals 
from which 
milk/eggs is 
produced for 
human 
consumption 
 
CHICKENS 
A residue depletion study for Doxycycline 50% WSP in broilers was provided (1993, GLP, Study No. 
30943).   
 
GLP 
Yes 
Study No.: 
30943 
Dose (mg/kg) 
25.3 mg doxycycline hyclate /kg bw/day for 5 days (mean) 
Dose (volume) 
50 mg product/kg bw/day for 5 days 
Route of administration 
Oral (in drinking water) 
Breed 
Ross 
Species 
Broilers 
Age 
40 days 
Weight 
1.83 kg (mean) 
Batch No. 
93015 
Certificate of analysis  submitted 
No. of animals per time point 

Sex 
Not sexed 
Slaughter time points 
0, 1, 2, 4, 6, 10, 14 and 20 days 
Analytical method 
Microbiological assay (SOP No. 830/90/0175) 
Method validated 
Yes 
LOQ 
50 µg/kg in kidney and liver; 20 
µg/kg in muscle and skin; 10 µg 
in fat 
 
About 20 gram of muscle, kidney and liver tissues (or as much as possible kidney) was cut in small 
pieces and homogenised in a Waring blender (muscle) or stomacher (kidney, liver) with the same 
weight phosphate buffer (0.2 M). The homogenates were deep frozen (:s-20°C) in PPN tubes until 
analysis. Muscle samples were taken from the breast area muscle.  Skin samples were taken from the 
breast and all feathers were removed followed by a thorough cleaning with hand warm water. The skin 
samples were homogenised in a Waring blendor for 1 minute with the same weight phosphate buffer 
(0.2 M) and deep frozen (<20°C) until analysis.  Abdominal fat was col ected and deep frozen (<-
20°C) until analysis. 
 
The quantitative determination of doxycycline in medicated water, plasma and tissue specimens was 
carried out by microbiological methods.  The agar large-plate method was used utilising B. subtilis BGA 
or B. cereus var. mycoides spores as test strains.  For quality control reasons spiked control samples 
(QC-samples) at 2 different levels were prepared with fresh blank material at the time of slaughter of 
the first broilers and deep frozen (<-20°C).  The QC-samples were analysed simultaneously with the 
samples.  Also for quality control reasons a number of experimental samples were subjected to 
replicate analysis (22% of the samples).   
 
After a withdrawal period of four days the average doxycycline concentrations in the tissues were 
below the MRL. Within six days after medication the mean doxycycline concentrations were below 100 
µg/kg in al  matrices. A withdrawal period of 4 days would be advisable after water medication of 25 
mg doxycycline/kg/day to broilers. 
 
Page 3/7 
 


Validation of the method 
The validation of the microbiological methods for determination of doxycycline in medicated water, 
plasma and various tissue specimens are summarised in the table below. The calibration curves for 
doxycycline in various matrices were linear in the range tested and revealed correlation coefficient 
>0.99.  The limits of quantifications (LOQs) were 10 ppb for fat, 20 ppb for skin and muscle, and 50 
ppb for plasma, kidney and liver.  The methods were reproducible with respect to replicate analysis of 
QC-samples and experimental samples (mean precision coefficient of variation < 8.1 %).  From the fat 
tissue the mean doxycycline recovery was 52.5 % (n= 23). 
 
 
 
Rapporteur’s comments
The study above is an old one but appears to have been conducted in a 
reasonable manner.  The right number of animals were used and all of the other study details were in 
accordance with current requirements.  The main shortcoming of the above study was the use of a 
microbiological assay.  Although, it was generally validated well, storage stability was not addressed in 
the above study.  The QC samples were not stored with the test samples to allow the effect of storage 
on the levels of the marker residue to be evaluated.  This could have affected the results that were 
reported. 

It is noted that the applicant now wishes to propose a chicken meat withdrawal period of 4 days, 
whereas 6 days was proposed during the Article 35 referral.  Using the ‘Alternative approach’, the first 
time point where residues in all tissues fell below their respective MRLs was 4 days (muscle and fat 
being the determining tissues).  A ‘safety span’ greater than is normally used for this type of product is 
required as storage stability has not been accounted for.  Hence, addition of a 30% ‘safety span’ gives 
a meat withdrawal period of 6 days.  The ‘Statistical approach’ could not be applied as the statistical 
assumptions were not met.  Therefore, a chicken meat withdrawal period of 6 days is proposed when 
chicken are administered 25 mg doxycycline/kg bw/day for 5 days. 

 
Co-rapporteur´s comments 
The co-rapporteur agrees with conclusion of rapporteur. In addition the influence of QC samples on 
results could be done by the earlier preparation (090793) in comparison with sampling (150793 – 

Page 4/7 
 


040893). The part of or whole picture with levels of residue is unreadable therefore we decided to put 
these tables on this place again:
 
 
 
Page 5/7 
 


 
 
Page 6/7 
 


 
Rapporteur’s conclusions
Given that QC samples were prepared at the same time as test samples and analysed together, the 
peer reviewer proposed that a 25% ‘uncertainty factor’ can be used.  The rapporteur agrees that with 
a 25% ‘uncertainty factor’, a chicken meat withdrawal period of 5 days can be accepted.  
Page 7/7 
 

Document Outline